بررسی مکانیسم مولکولی آپوپتوز القا شده توسط تهرانولید تخلیص شده از آرتمیزیا دیفوزا بر روی رده سلولی لوسمی

هدف از آپوپتوز دارویی شناسایی خاصیت القا آپوپتوز توسط مواد شیمیایی ، دارویی ویا ترکیبات طبیعی وکشف مکانیسم آنها جهت امکان تقویت و اختصاصی ساختن اثرات آنهاست. از این خاصیت تحت عنوان آپوپتوز القا شده توسط داروها نام برده شده و روز به روز به تعداد چنین ترکیباتی افزوده می شود. از داروهایی که چنین خاصیتی را نشان داده است میتوان از آرتمیزینین نام برد. این ترکیب یک سزکویی ترپن لاکتون استخراج شده از گیاه آرتمیزیا آنوااست که آن فعالیت ضد سرطانی دارد. ترکیب جدید تهرانولید، یک سزکویی ترپن لاکتون استخراج شده از گیاه بومی ایران ، آرتمیزیا دیفوزا ،می باشد در این مطالعه هدف بررسی اثرات ضد سرطانی و تاثیرات این ترکیب بر مکانیسم های مولکولی آپوپتوز می باشد، تهرانولید را از گیاه آرتمیزیا دیفوزاََََ استخراج وخالص نموده و القاءآپوپتوز توسط ماده ی مزبوردر رده ی سلولی k562 ومکانیسم مولکولی آنرا بررسی نموده،در این مطالعه تکثیر سلولی و سیتوتوکسیته با استفاده از تست mtt ارزیابی گشته و آپوپتوز با روش فلوسایتومتری و میکروسکوپ فلورسنت بررسی شد. سنجش افزایش میزان کاسپاز-3 فعال شده به روش رنگ سنجی ومقدار پروتئین bax, bcl-2سلول ها نیز با متد وسترن ایمونوبلاتینگ سنجیده شده است. از رنگ هوخست 33258 برای بررسی تغییرات مورفولوژی هسته در فرایند آپوپتوز استفاده شده است. رسپتور cd95 با آنتی بادی anti-cd95 (zb4)مسدود گردید تا تعیین شود که ایا مسیر خارجی برای القاآپوپتوز توسط تهرانولید ضروری است . میزان ros داخل سلولی با استفاده از carboxy-h2dcfda با دستگاه فلورسانس تعیین شد ، قطعه قطعه شدن dna ناشی از فعال شدن اندونوکلئازها در آپوپتوز با طرح نردبانی dna بر روی ژل الکتروفورز بررسی شد. رنگ آمیزی tunel که برای ارزیابی فراگمانتاسیون dna در سلولهای آپوپتوتیک است، مورد استفاده قرار گرفت. نتایج بدست آمده حاکی ازآن است که تهرانولید باعث القا آپوپتوز در سلول های k562 شده و بر روی سلول های نرمال اثر سیتوتوکسیته ندارد. مسیر القا آپوپتوز در سلول های k562 مستقل از مسیر خارجی است.